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熒光定量Q-PCR檢測的取樣及運輸須知
更新時間:2019-03-07   點擊次數:1636次
   熒光定量Q-PCR檢測的取樣及運輸須知
  熒光定量Q-PCR檢測是利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化開放以來,通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
  它的擴增曲線反應了Q-PCR動態(tài)進程的曲線。
  熒光閾值:前15個循環(huán)信號作為熒光本底信號更高效,熒光閾值的默認設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍全面協議,如果手動設置則設置大于熒光背景值和陰性對照的熒光高值,進入指數期的初階段具體而言。
  CT值:PCR擴增過程中工具,擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的擴增循環(huán)次數。
  Q-pcr的取樣及運輸事項:
  一喜愛、細胞收集及保存
  1.貼壁細胞胰酶消化后900轉5min離心至管底(非貼壁細胞直接離心)重要的角色,棄上清,將細胞凍存與-80度長期保存向好態勢,-20度平臺建設,暫時保存。若用于Q-PCR盡量使用滅菌無RNA酶離心管貢獻力量,RNA樣本保存液中-80度長期保存使用。
  2.組織樣本取樣后立即-80或者液氮保存。后續(xù)用于Q-PCR的取樣后立即存于液氮或者-80度環(huán)境中發行速度,或者放于有RNA樣本保存液的滅菌無RNA酶離心管中-80度保存更加堅強。
  二、樣本運輸
  短時2h左右冰袋或者液氮運輸性能,干冰(干冰可以維持-70度)密封運輸初步建立。
  三、樣本編號
  樣本標號清晰供給,須提供樣本清單的方法。
  病理實驗取樣及實驗注意事項:
  1.動物組織提取后(玉米粒大小即可)迅速保存于4%多聚甲醛中固定,管體標號進行探討,組織塊盡量少帶血液持續,或可以用多聚甲醛將樣本稍作清洗等多個領域,常溫保存,常溫運輸產品和服務。做電鏡的樣本由2.5%戊二醛固定于15ml離心管內應用擴展,樣本直徑小于2mm,常溫保存常溫運輸增多。
  2.細胞樣本制作成爬片后PBS浸潤保存與細胞培養(yǎng)板內活動上,密封常溫運輸。做電鏡的細胞離心收集好后2.5%戊二醛固定進一步推進,常溫運輸導向作用。
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