免疫組化原理
免疫組化染色是用一抗與被檢測組織中目的蛋白抗原結(jié)合互動式宣講，然后用HRP等標記的二抗與一抗進行結(jié)合效高性，后通過與DAB顯色劑反應(yīng)，進而確認所要檢測蛋白抗原的定位自動化、半定量等目的提升。
? 免疫組化更多的意義在于查看目的蛋白的定位。定量一般用western來實現(xiàn)不折不扣。
免疫組化染色和HE染色的不同之處可能是HE染色比較粗略地辨認不同細胞形態(tài)學(xué)改變支撐能力；而后者能夠針對特異性細胞標志物來檢測特異性細胞的改變（數(shù)量）、也可檢測細胞內(nèi)細胞因子的轉(zhuǎn)位高效利用，組織中一些特異性蛋白的表達的量改變（通過圖像分析系統(tǒng)分析顏色深淺特征更加明顯、分布的面積等綜合分析）。
? 通俗的講講理論，HE僅僅是看大體病理改變數字技術，比如組織壞死，比如炎性滲出市場開拓。免疫組化措施，看你的目的蛋白的表達情況。
免疫組化和HE染色的對比
DAB和HE一樣也是一種染色劑新模式，HE染色相對簡單實現，能分辨出細胞中的嗜酸嗜堿性物質(zhì)；DAB染色全稱應(yīng)該叫做免疫組化DAB染色組織了，經(jīng)過一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)后服務體系，DAB(二氨基聯(lián)苯胺)染色劑能將辣根過氧化物酶染成棕色。
常用的免疫組化染色方法
組化用HRP的話搶抓機遇，信號不夠強分析。通常用生物素標記HRP來增強信號表示。
ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法）
? ABC法是利用卵白素與生物素*的高度親和力特性，與生物素化二抗結(jié)合非常激烈，形成抗原＋特異性抗體＋生物素化二抗＋卵白素＋生物素＋HRP復(fù)合物競爭力所在，后DAB顯色。
? 復(fù)合物配制：先將生物素與酶結(jié)合領域，形成生物素化HRP溝通機製，以生物素化HRP與卵白素按一定比例混合，形成卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物註入新的動力。
SP法（抗生物素蛋白鏈酶素-過氧化物酶復(fù)合物）
? 本身沒有連接生物素領先水平，但有兩個生物素親和力*的結(jié)合位點，可以與二抗上的生物素結(jié)合雙重提升，敏感性高戰略布局，復(fù)合物不需要使用前混合，更為簡便表現明顯更佳。
PAP法
直接法
樣本制備
免疫組化結(jié)果分析
免疫組化結(jié)果的判斷原則：
? 必須設(shè)陽性對照和陰性對照讓人糾結。
? 抗原表達必須在特定部位。
? 陰性結(jié)果不能視為抗原不表達穩定發展。
免疫組化染色實驗組與對照組結(jié)果分析表
從表可以看出只有6基石之一、7實驗結(jié)果有意義。1-5均因?qū)φ战M的結(jié)果已否定Ab的特異性或IHC技術(shù)操作存在錯誤等而使實驗結(jié)果失去意義增持能力，必須重復(fù)實驗或換用Ab共同努力。
染色失敗的幾種情況及原因
染色失敗的幾種情況。
? 所染的全部切片均為陰性結(jié)果追求卓越，包括陽性對照在內(nèi)逐漸完善。
? 所有切片均呈陽性反應(yīng)。
? 所有切片背景過深合理需求。
? 陽性對照染色良好廣泛關註，檢測的陽性標本呈陰性反應(yīng)。
所有切片呈陽性反應(yīng)發力，其原因:
? 切片在染色過程中抗體過濃優勢領先，或干片了。
? 緩沖液配置中未加氯化納和PH值不準確共創美好， 洗滌不*推動並實現。
? 使用已變色的呈色底物溶液，或呈色反 應(yīng)時間過長覆蓋範圍。
? 抗體溫育的時間過長優化程度。
? H2O2濃度過高，呈色速度過快且粘附劑太厚奮勇向前。
所有切片背景過深不斷豐富，其原因:
? 內(nèi)源性過氧化酶沒有*阻斷實施體系。
? 切片或涂片過厚。
? 漂洗不夠各有優勢。
? 底物呈色反應(yīng)過久效果較好。
? 蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血。
? 使用全血清抗體稀釋不夠快速增長。
陽性對照染色良好，檢測的陽性標本呈陰性反應(yīng)占。
? 常見的原因:
標本固定和處理不當高質量。
注意事項
? 蘇木素復(fù)染時間需要摸索，尤其要考慮陽性染色的位置激發創作。
? 切片脫蠟和水化要充分前景；加反應(yīng)液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液增幅最大，但又防止干片共享應用。
?以下原因可能導(dǎo)致片子著色不均勻：
①脫蠟不充分藴?？梢?/span>60℃烤20min示範推廣，立即放入新鮮的二甲苯中。
②水化不全即將展開。應(yīng)經(jīng)常配制新鮮的梯度乙醇大幅增加。
③抗體沒混勻。用移液器充分混勻一抗/二抗等試劑傳承。④抗體孵育時進展情況，切片放傾斜。
⑤抗體孵育后PBS沖洗不充分綠色化發展。
⑥制片厚薄不均勻等問題至關重要。
⑦染片盒不平，切片傾斜用上了。
?一抗的清洗:
單獨沖洗提升行動，防止交叉反應(yīng)造成污染。
溫柔沖洗關註，防止切片的脫落自然條件，推薦用浸洗方式。
沖洗的時間要足夠開展，才能*洗去 結(jié)合的物質(zhì)互動互補。
?PBS的PH和離子強度的使用。
建議PH在7.4-7.6濃度是0.01 M意向。
中性及弱鹼性條件（PH7-8）有利 于免疫復(fù)合物的形成意料之外，而酸性條件則有利于分解文化價值；低離子強度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強度則有利 于分解置之不顧。
?拍照
有條件的話應(yīng)該立即拍照不斷完善，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固方便，保持避光和濕度基礎上。
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