Fish IF共染原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程生產創效。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行結構。IF即免疫熒光，可檢測組織或細(xì)胞中某蛋白的表達(dá)情況及定位優化上下。

原位雜交(FISH能力建設、IF雙標(biāo))可以檢測靶基因與靶蛋白的共定位情況。

Fish IF共染實驗步驟

1生產體系、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h服務。

2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟能力和水平，包埋覆蓋。

3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片研究，攤片機(jī)撈片高效，62°烤箱烤片2h應用創新。

4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗體系。

5生產製造、消化：根據(jù)組織固定時間長短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘攜手共進，自然冷卻共同。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性經過，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min簡單化。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

6明確了方向、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液系統性，37°C孵育1h。

7單產提升、雜交：傾去預(yù)雜交液傳遞，滴加含探針雜交液,恒溫箱37度雜交過夜。

8勞動精神、雜交后洗滌：洗去雜交液開展攻關合作，2×SSC，37°C 洗10min動手能力，1×SSC逐步改善，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min提升。若非特異雜交體較多大大提高，可以增加甲酰胺洗滌。

9研究成果、孵育一抗：滴加一抗取得了一定進展，PBS稀釋。4°過夜大面積。后PBS洗3×5min可能性更大。

10、孵育二抗：滴加相應(yīng)二抗搖籃，室溫孵育50min。后PBS洗3×5min推廣開來。

11推動、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min資源配置，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片信息。

12.鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像相關。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm豐富內涵，發(fā)射波長515-555 nm生產效率，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm適應性，發(fā)紅光節點。)

送樣運(yùn)輸要求：

冰切。標(biāo)本放原位雜交固定液中落地生根，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20°運(yùn)輸的特點。

石蠟。標(biāo)本放原位雜交固定液中有效保障，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸大數據。

細(xì)胞爬片。細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后講實踐，密封數字技術，4度運(yùn)輸。共聚焦皿

新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理改革創新，后干冰運(yùn)輸?shù)轿錆h進(jìn)行后續(xù)冰凍切片處理知識和技能。新鮮組織-80°保存。

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