更新時(shí)間:2024-09-26
外泌體電鏡可以直觀的看到粒子的形態(tài)需求,因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性,但是包括支原體應用提升、鐵蛋白聚團(tuán)試驗、聚乙二醇蛋白聚團(tuán)行動力、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似,并且電鏡只能展示局部景象切實把製度。因此,電鏡成像無法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子自行開發,且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量進行部署。
1保護好、樣品制備:
收集外泌體樣品:收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液、生物體液(如血漿表現、尿液等)或組織液體(如腦脊液等)特點,其中包含外泌體。
預(yù)處理:通常需要對(duì)樣品進(jìn)行初步處理結論,如離心去除細(xì)胞碎片和大顆粒物質(zhì)和諧共生。
電鏡固定:
固定樣品:使用適當(dāng)?shù)墓潭▌ㄈ缥於⒗鋬龉潭ǖ龋⑼饷隗w固定在其原來的狀態(tài)中適應性強,以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)技術交流。
洗滌:用緩沖液洗滌樣品,以去除過剩的固定劑拓展。
2創造更多、脫水和浸透:
脫水:在一系列濃度遞增的乙醇溶液中,逐步將樣品中的水分脫除不斷進步,以使樣品適應(yīng)后續(xù)的樹脂浸透工藝技術。
浸透:使用合適的樹脂(如Epon、Araldite等)浸透樣品規模,使其在固化后具有適合電鏡觀察的硬度和清晰度近年來。
3、樹脂包埋:
預(yù)埋:將浸透后的樣品置于埋脂盒中非常完善,加入適量的樹脂性能穩定,并根據(jù)需要進(jìn)行定向。
固化:根據(jù)樹脂的不同作用,采用適當(dāng)?shù)臏囟群蜁r(shí)間進(jìn)行固化情況正常,使樣品堅(jiān)硬并固定在樹脂塊中。
4、超微切片:
準(zhǔn)備超薄切片:使用超薄切片機(jī)落實落細,將樹脂塊切割成約60-90納米厚度的超薄切片相結合。
收集切片:將切片收集在銅或金網(wǎng)格上,以便后續(xù)的電鏡觀察製高點項目。
5為產業發展、電鏡觀察:
雙重染色:通常首先使用重金屬鹽(如鈾酸和鉛酞)對(duì)切片進(jìn)行雙重染色,以增加對(duì)比度有所增加。
電鏡觀察:將樣品放置在透射電鏡中各項要求,利用電子束通過樣品,觀察外泌體的形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)越來越重要的位置。
拍攝圖像:使用透射電子顯微鏡(TEM)或掃描電子顯微鏡(SEM)拍攝外泌體的高分辨率圖像新技術。
外泌體電鏡觀察是一項(xiàng)復(fù)雜的技術(shù),需要在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行順滑地配合。實(shí)驗(yàn)條件和步驟可能會(huì)因?qū)嶒?yàn)?zāi)康暮驮O(shè)備不同而有所變化深入。為了獲得高質(zhì)量的觀察結(jié)果,建議在進(jìn)行外泌體電鏡觀察時(shí)咨詢專業(yè)人士或參考相關(guān)文獻(xiàn)前沿技術。
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