在外泌體western鑒定研究領域的可能性，NTA技術已被用作外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式服務為一體，NTA技術的樣本處理更簡單問題，更能保證外泌體原始狀態(tài)，檢測速度更快要落實好。大致方法是：將收集的外泌體用PBS稀釋至10^6/mL緊密相關，用1 mL注射器注入納米顆粒跟蹤分析儀(如裝有450 nm激光器的Nanosight NS300顆粒粒度分析儀)；激光光束穿過樣本室外泌體顆粒先進技術，通過裝有攝像頭的顯微鏡實現(xiàn)顆粒可視化不合理波動，捕捉外泌體的布朗運動宣講手段，利用愛因斯坦方程式根據(jù)其運動計算濃度和流體力學直徑重要工具。SBI公司新開發(fā)的一種排除非外泌體顆粒干擾的試劑盒，還可幫助實現(xiàn)對完整外泌體的NTA分析配套設備。除了NTA以外更優質，還有種動態(tài)光散射技術（DLS），其原理是：用一束激光打向存放樣品的容器推進高水平，再在90°這樣一個角度去檢測散射光脫穎而出，得到散射光光強圖譜，通過對圖譜進行時間相關分析好宣講；時間分析圖中開始衰減的地方就代表著外泌體的粒徑大小註入新的動力，但是缺少濃度信息；也就是說DLS其實就是通過對不同時間散射光強度的分析，從而得到外泌體相應的粒徑雙重提升。
掃描電鏡（SEM）的工作原理是用能量為1~30 KV間的電子束，以光柵狀掃描方式照射到被分析試樣的表面上事關全面，利用入射電子和試樣表面物質(zhì)相互作用所產(chǎn)生的二次電子和背散射電子成像表現明顯更佳，獲得試樣表面微觀組織結構和形貌的高分辨率信息。由于超高真空技術的發(fā)展技術節能，場發(fā)射電子槍的應用得到普及指導，現(xiàn)代先進的SEM的分辨率已經(jīng)達到1 nm左右，足夠用來進行外泌體尺寸的測量國際要求。透射電鏡（TEM）是把經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上流動性，電子與樣品中的原子碰撞而改變方向，從而產(chǎn)生立體角散射行業內卷。散射角的大小與樣品的密度追求卓越、厚度相關，因此可以形成明暗不同的影像參與能力，影像放大合理需求、聚焦后在成像器件(如熒光屏、膠片充分發揮、感光耦合組件)上顯示出來高質量。
外泌體western鑒定時通常會檢測哪些指標蛋白？
根據(jù)22篇外泌體相關文獻的統(tǒng)計選擇適用，排在前4位的檢測指標為CD63（13/22）管理、Tsg101(8/22)、 CD9和CD81并列第三位（6/22）業務指導；接著檢測較多的4個指標為Alix（4/22）改進措施、 HSP70(3/22)、 flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)長足發展；此外還有一些指標僅在1篇文獻中出現(xiàn)過今年，例如HSP90穩步前行、LAMP2B、LMP1動手能力、ADAM10各有優勢、nicastrin、AChE重要的意義、AQP2持續、RPL5、a-1AT再獲。
針對外泌體的定性檢測至少選擇兩個指標就能滿足文章發(fā)表需要了產品和服務，比如檢測CD63和Tsg101。
外泌體western鑒定定性檢測中有沒有陽性對照激發創作？
從發(fā)表的文章來看前景，并沒有一篇文章結果中提到了陽性對照樣品，但是已經(jīng)被文獻報道的樣品可以作為后人Western blot檢測實驗的陽性對照增幅最大，通過這樣陽性樣品的檢測來判斷實驗體系是否正常共享應用。羅列一下文獻中的陽性對照樣品：脂肪組織巨噬細胞外泌體、神經(jīng)干細胞外泌體標準、大鼠皮層神經(jīng)元外泌體示範推廣、SCC-9和Cal-27細胞外泌體、MDA-MB-231外泌體即將展開、星型膠質(zhì)細胞外泌體大幅增加、中性白細胞外泌體等。
外泌體western鑒定主要檢測指標為CD63傳承、CD9等特點、CD81、Tsg101多種、Alix將進一步、HSP70等，針對外泌體的定性檢測發展成就，至少選擇2-3個指標就能滿足文章發(fā)表就可以成就。大部分文獻中沒有檢測內(nèi)參，個別文章中使用了Actin開展面對面、GAPDH和Tubulin作為內(nèi)參進行檢測系統，外泌體中的Actin、GAPDH和Tubulin的表達豐度相對于正常細胞樣品中的較低進一步提升，可能會檢測不到任何條帶或者條帶微弱空間廣闊。
外泌體western鑒定操作步驟大致是：
用PBS重懸提取的外泌體，滴于孔徑2 nm的載樣銅網(wǎng)上系統，室溫靜置2 min意料之外，用濾紙從濾網(wǎng)側邊吸干液體文化價值，用3%磷鎢酸溶液在室溫下負染5 min形式，濾紙吸干負染液置之不顧，室溫晾干，電鏡觀察拍照數字化。外泌體在電鏡下具有非常明顯的膜邊界方便、呈30~100 nm大小不一的茶托或杯狀結構(也會有200 nm以下、較難鑒別的其他形狀的外泌體)各領域，但電鏡對樣品的預處理和制備要求較高應用領域，樣品分離方法和樣品性質(zhì)可能影響電鏡結果的好壞；樣品的準備階段比較復雜進行培訓，不適合對外泌體進行大量快速的測量發展機遇；且因外泌體經(jīng)過了預處理和制備過程，無法準確測量法治力量。
掃描電鏡(scanning electron microscopy, SEM)或透射電鏡(transmission electron microscopy, TEM)等電子顯微鏡可用于外泌體鑒定全技術方案。SEM的工作原理是用能量為1~30 KV間的電子束，以光柵狀掃描方式照射到被分析試樣的表面上共享，利用入射電子和試樣表面物質(zhì)相互作用所產(chǎn)生的二次電子和背散射電子成像信息化，獲得試樣表面微觀組織結構和形貌的高分辨率信息。由于超高真空技術的發(fā)展生動，場發(fā)射電子槍的應用得到普及新型儲能，現(xiàn)代先進的SEM的分辨率已經(jīng)達到1 nm左右，足夠用來進行外泌體尺寸的測量新品技。TEM是把經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上範圍，電子與樣品中的原子碰撞而改變方向，從而產(chǎn)生立體角散射紮實做。散射角的大小與樣品的密度空間廣闊、厚度相關，因此可以形成明暗不同的影像，影像放大雙重提升、聚焦后在成像器件(如熒光屏、膠片事關全面、感光耦合組件)上顯示出來表現明顯更佳。
以上兩種方法是常用的外泌體的鑒定方法，是展開外泌體功能研究的前提等形式。比如在腫瘤研究中技術的開發，通過提取鑒定不同細胞系中的外泌體，進而通過PCR以及測序篩選分析RNA飛躍，探究外泌體在腫瘤進展或者耐藥中的發(fā)生機制更高效。
